Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病患进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到肾脏自身亚基质到用到1M-肝炎临床副作用的方面部将在青少年时期就有很好的刻画，多个肾脏自身亚基质乙M-肝炎的青少年里面有70%在血清转换后10将近患有肝炎，而随访15年的青少年这一比例减低到84%。来得之下，占临床1M-肝炎一半以上的M-1M-肝炎的病症机制还很难获取更好的科学研究。

越发多的人开始用到分期该系统来并不一定1M-肝炎的方面：个本体在用到多种肾脏自身亚基质时转至第1前期，用到血糖异常时转至第2前期，用到副作用时转至第3前期。一些多发肾脏自身亚基质乙M-肝炎的个本体，在1期和2期，方面较慢速，并发展为病症的1M-肝炎。我们以后刻画了都由在首次扫描到多种肾脏自身亚基质抽样后据估计10年无肝炎的以致于慢速方面者，这第三组病症人数少，但外观上非常明确。随后，我们发现肾脏自身亚基质特异性CD8+T亚基中间体在方面尤其慢速的病症里面整本体不普遍存在，但在近期病症和长期普遍存在的肝炎病症里面很较难扫描到。这意味著确实，与方面病症来得，这些病症自身免疫中间体的恒定弱化。

早期科学研究确实，尽管恒定性T亚基(Treg)使用量经常性，但肝炎病症普遍存在一些功能不足之处，其里面以外对IL-2的中间体能力减低。此外，肝炎病症里面的现像CD4+T亚基意味著对恒定非常具抵抗性，乏善可陈为现像T亚基的可借逼近，自然现象激发的Treg和本体外激发的可借Treg，以及亚基质经历的CD4+T亚基里面IL-2中间体逼近。本科学研究的目的是刻画了CD4+恒定性T亚基(Treg)在领头以致于尤其慢速方面者里面的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

新方法：BOX科学研究是一项以人群依此的平行科学研究，在21岁请注意住院的病症血亲里面检查1M-肝炎的危险考量。我们以后刻画了长期尤其慢速方面者的外观上，他们保持多重肾脏自身亚基质乙M-肝炎超过10年，但很难用到肝炎的临床副作用，慢速性或非完成性自身免疫。随后，10名暂时保持无肝炎并乐意提供大量血液循环抽样的尤其慢速方面者归入T和B亚基功能统计分析。在目前的科学研究里面，8名慢速方面者(SP第三组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的肾脏自身亚基质乙M-肝炎。所有的行动者都位处1M-肝炎方面的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身亚基质对某些亚基质的乙M-肝炎中间体，然而，一名病症已经位处2期据估计6年，但很难用到临床副作用，一名病症被诊断为肝炎，该受试者72岁，在采集实验抽样时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据处理里面对该遗传物质完成了整本体上指标。分离外周血单个核亚基(PBMCs)，引入多实例流式亚基术和T亚基可借试验指标遗传物质里面Treg的kHz、遗传基因和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类检查和、相关联和回归)完成无监督聚类统计分析，指标Treg遗传基因。

结果：与肥胖症遗传物质来得，来自慢速方面本体的梦境CD4+T亚基的监督聚类推测，激活的梦境CD4+ TregkHz减低，与糖皮质激素可借的TNFR相关亚基(GITR)突显减低有关。一名HbA1c升温的病症与方面尤其慢速者和给定的对照第三组来得，Treg谱相同。功能统计分析确实，与肥胖症遗传物质来得，来自尤其慢速方面本体的Treg介导的CD4+现像T亚基可借明显受损。乏善可陈为对现像CD4+T亚基CD25和CD134突显的可借减低。

示意图1 深入的遗传基因统计分析推测，CD4+Treg亚M-在慢速方面路由表里面减低。由FlowSOM生成的Treg室，群聚在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -亚基上。根据标有物突显检查和出10个元簇:梦境T亚基_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T亚基;HLA-DR + GITR +梦境T亚基;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用到9个完全相同Treg标有生成的10个元簇的MST。每个数据流代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，较大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在数据流第三组周围上色。每个数据流里面的饼示意图声称单个标有的突显行政级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推测整本体标有突显。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)生成示意图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于原子量为每个metacluster木箱中央线示意图(原子量> 0.05%)未确定为HD和SP第三组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T亚基(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T亚基(l)。深蓝色白点代表这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检查和。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用到CITRUS的预测模M-确认，TregkHz的减低是方面尤其慢速的标志。分级门控(a - f)和柑橘统计分析(g-k)尤其SP行动者和给定的HD行动者在CD4+CD45RA−T亚基上的相异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR突显完成分离，模拟器FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(杂色)第三组以及遗传物质SP 606(深蓝色)里面CD25+ cd127的kHz概要示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的木箱中央线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)果树簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3突显数值着色，箭头突出的簇被比对为SP和HD路由表二者之间的完全相同。(j)木箱中央线示意图推测了在SP(杂色)和HD(灰点)第三组里面，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对于原子量(比例)。(k)直方示意图推测每个簇的遗传基因(紫色)和Treg标有相对于突显与氛围突显(紫色);上列，闪存Treg_3;下面偷偷地，闪存Treg_4。氛围与所有其他簇里面标有的突显有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检查和

示意图3 与肥胖症献血者来得，方面尤其慢速者梦境treg的GITR减低。每个梦境CD4+T亚基元簇(梦境T亚基_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T亚基;HLA-DR + GITR +梦境T亚基;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个突显标有的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的突显热示意图(sp606不以外在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR突显相联，推测直方示意图(c)和概要示意图(d)。Wilcoxon配对下标秩和检查和，p< 0.07(深蓝色)所有遗传物质以外，p< 0.05(紫色)遗传物质SP 606和给定的HD不以外在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR突显，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(深蓝色)相联，推测直方示意图(e)和概要示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对下标秩检查和

示意图4 来自尤其慢速方面的CD4+ treg亚基掌控现像CD4+T亚基的能力减低。SP第三组用紫色的中央线和白点声称，HD第三组用红色的中央线和白点声称，深蓝色的中央线/白点声称遗传物质sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T亚基完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被标有为CFSE, Treg按检视的比例滴定。用抗CD3 /28微珠还原亚基，养成3紧接著完成流式亚基术扫描。(a-d)与CD4+接收者者相对于应的treg养成(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者养成。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE可借百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可借百份。用到乙M-肝炎对照(激活的响应亚基则有treg)计算出来可借百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

示意图5 现像CD4+T亚基对尤其慢速方面的T亚基还原的可借非常寻常。SP第三组用紫色的中央线和白点声称，HD第三组用红色的中央线和白点声称，深蓝色的中央线/白点声称遗传物质sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T亚基完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标有，treg按检视的比例滴定。用抗CD3 /28微珠还原亚基，养成3紧接著完成流式亚基术(CD25反染)和亚基因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者携手养成。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE可借%-(b)。(c,d) CD25可借%-(c)和CD134可借%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成里面的突显。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

论据：我们得出的论据是，来自尤其慢速方面子的还原梦境CD4+Treg在GITR突显里面获取了扩展和多样化，突显了全面性科学研究Treg在1M-肝炎可能会个本体里面的异质性的有效性。

原文典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28