Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型肾病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到肝细胞自身突变到用到1改型乳癌病理病因的困难重重不下在孩童时期就有比较好的描绘，多个肝细胞自身突变形态性的孩童当则有70%在血清转换后10年末中风乳癌，而随访15年的孩童这一人口比例提高到84%。远比之下，九成病理1改型乳癌一半以上的改型1改型乳癌的发病系统还并未受益必要的全面性研究。

越来越多的人开始应将用于分段系统来假定1改型乳癌的困难重重：生殖在用到多种肝细胞自身突变时转回第1先决条件，用到血糖持续性时转回第2先决条件，用到病因时转回第3先决条件。一些多发肝细胞自身突变形态性的生殖，在1期和2期，困难重重较比较慢，并的发展为发病的1改型乳癌。我们此前描绘了一第三组在首次样品到多种肝细胞自身突变取样后至较少10年无乳癌的快得多困难重重者，这第三组病患000人较少，但形态非常明确。随后，我们发现肝细胞自身蛋白基因表达CD8+T受纤质反应会将在困难重重减比较慢的病患当中基本不假定，但在近来发病和长期假定的乳癌病患当中很难以样品到。这确实说明，与困难重重病患远比，这些病患自身致病的调节提升。

早期全面性研究说明，尽管调节性T受纤质(Treg)数量正常，但乳癌病患假定一些动态缺陷，其当中除此以外对IL-2的反应会将控制能力下降。此外，乳癌病患当中的不稳定性将CD4+T受纤质确实对调节更为重要抵抗性，表现为不稳定性将T受纤质的正向移向，自然产生的Treg和游离产生的正向Treg，以及蛋白经历的CD4+T受纤质当中IL-2反应会将移向。本全面性研究的目的是描绘了CD4+调节性T受纤质(Treg)在大群极减比较慢困难重重者当中的形态，他们的平均年纪为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

原理：BOX全面性研究是一项以人群为基础的主干全面性研究，在21岁以下胃癌的病患亲属当中检查1改型乳癌的危险状况。我们此前描绘了长期减比较慢困难重重者的形态，他们保证多重肝细胞自身突变形态性大约10年，但并未用到乳癌的病理病因，比较慢性或非受累致病。随后，10名在此之后保证无乳癌并愿意提供大量血液取样的减比较慢困难重重者扩展到T和B受纤质动态比对。在目前的全面性研究当中，8名比较慢困难重重者(SP第三组)，当中位年纪43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的肝细胞自身突变形态性。所有的参与者都处于1改型乳癌困难重重的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身突变对某些蛋白的抽血，然而，一名病患已经处于2期至较少6年，但并未用到病理病因，一名病患被诊断为乳癌，该患者72岁，在采集试验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据处理当中对该酪氨酸开展了实质上评量。受控外周血单个核受纤质(PBMCs)，转用多变量流式受纤质精和T受纤质正向试验评量酪氨酸当中Treg的频不下、基因表达和动态。应将用于FlowSOM和CITRUS(聚类断定、举例来说和复出)开展无都由聚类比对，评量Treg基因表达。

结果：与保健酪氨酸远比，来自比较慢困难重重纤的思绪CD4+T受纤质的都由聚类标示出，启动时的思绪CD4+ Treg频不下提高，与糖皮质激素正向的TNFR具体受纤(GITR)理解提高有关。一名HbA1c升高的病患与困难重重减比较慢者和比如说的对照第三组远比，Treg谱有所各有不同。动态比对说明，与保健酪氨酸远比，来自减比较慢困难重重纤的Treg介导的CD4+不稳定性将T受纤质正向引人注意损坏。表现为对不稳定性将CD4+T受纤质CD25和CD134理解的正向提高。

三幅1 全面性的基因表达比对标示出，CD4+Treg亚改型在比较慢困难重重配置文件当中提高。由FlowSOM转化的Treg室，涌进在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -受纤质上。根据标明物理解断定出10个元簇:思绪T受纤质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T受纤质;HLA-DR + GITR +思绪T受纤质;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)应将用于9个各有不同Treg标明转化的10个元簇的MST。每个终端推选一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更多的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在终端第三组周围上色。每个终端当中的饼三幅问到单个标明的理解等级。(b)每个元聚类的热三幅，以标示出全面性标明理解。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转化三幅，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)远比金属量为每个metacluster筒两条路线三幅(金属量> 0.05%)断定为HD和SP第三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T受纤质(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T受纤质(l)。橙色带子推选理应将SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 应将用于CITRUS的预测模改型证实，Treg频不下的提高是困难重重减比较慢的图标。分级依赖型(a - f)和甜菜比对(g-k)比较SP参与者和比如说的HD参与者在CD4+CD45RA−T受纤质上的相似之处。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的民族特色三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解开展受控，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(白斑)和SP(虎纹)第三组以及酪氨酸SP 606(橙色)当中CD25+ cd127的频不下汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型集合的筒两条路线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)果树簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解低压着色，箭头突出的簇被标记为SP和HD配置文件二者之间的各有不同。(j)筒两条路线三幅标示出了在SP(虎纹)和HD(灰点)第三组当中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的远比金属量(人口比例)。(k)直方三幅标示出每个簇的基因表达(粉红色)和Treg标明远比理解与历史背景理解(浅蓝色);上列，寄存器Treg_3;下面正要，寄存器Treg_4。历史背景与所有其他簇当中标明的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与保健献血者远比，困难重重减比较慢者思绪treg的GITR提高。每个思绪CD4+T受纤质元簇(思绪T受纤质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T受纤质;HLA-DR + GITR +思绪T受纤质;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个理解标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的理解热三幅(sp606不除此以外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR理解串联，标示出直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橙色)所有酪氨酸除此以外，p< 0.05(浅蓝色)酪氨酸SP 606和比如说的HD不除此以外在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR理解，从分级依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橙色)串联，标示出直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自减比较慢困难重重的CD4+ treg受纤质控制不稳定性将CD4+T受纤质的控制能力下降。SP第三组用浅蓝色的两条路线和带子问到，HD第三组用灰色的两条路线和带子问到，橙色的两条路线/带子问到酪氨酸sp606。应将用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T受纤质开展分选。CD4+CD25−(此番者)被标明为CFSE, Treg按注意到的人口比例反应会将物。用抗CD3 /28微珠激活受纤质，养成3在此之后开展流式受纤质精样品。(a-d)与CD4+此番者远比应将的treg养成(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者养成。(a,b,f) CFSE正向(a,e)和CFSE正向倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的正向倍数。应将用于形态性对照(启动时的响应将受纤质不含treg)计算正向倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 不稳定性将CD4+T受纤质对减比较慢困难重重的T受纤质激活的正向更恰当。SP第三组用浅蓝色的两条路线和带子问到，HD第三组用灰色的两条路线和带子问到，橙色的两条路线/带子问到酪氨酸sp606。应将用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T受纤质开展分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标明，treg按注意到的人口比例反应会将物。用抗CD3 /28微珠激活受纤质，养成3在此之后开展流式受纤质精(CD25反染)和受纤质因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同养成。(a,b) CFSE正向(a)和CFSE正向百分不下(b)。(c,d) CD25正向百分不下(c)和CD134正向百分不下(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在名教授当中的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们得出的事实是，来自减比较慢困难重重子的激活思绪CD4+Treg在GITR理解当中受益了扩张和丰富，强调了更进一步全面性研究Treg在1改型乳癌风险生殖当中的异质性的必要性。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28